Флюресценцийн резонансын энерги дамжуулах (FRET)
Флюресценцийн резонансын энергийн дамжуулалт (FRET) нь молекул хоорондын цахилгаан хосуудын харилцан үйлчлэлийн үр дүнд донорын өдөөгдсөн төлөвийн энерги нь хүлээн авагчийн өдөөгдсөн төлөвт шилждэг цацрагийн бус энерги дамжуулах процесс юм.Энэ үйл явц нь фотоныг оролцуулдаггүй тул цацраг туяа үүсгэдэггүй.Энэхүү шинжилгээ нь хурдан, мэдрэмжтэй, энгийн байдлаараа давуу талтай.
FRET шинжилгээнд ашигласан будаг нь ижил байж болно.Гэхдээ ихэнх хэрэглээнд өөр өөр будагч бодисыг ашигладаг.Товчхондоо, гэрэлтэгч резонансын энергийг шилжүүлэх нь донорын бүлгийг өдөөх үед донороос (будаг 1) хүлээн авагч руу (будаг 2) хос диполийг шилжүүлэх явдал юм.Ерөнхийдөө Донор фторфорын бүлгийн ялгаралтын спектр нь хүлээн авагч бүлгийн шингээлтийн спектртэй давхцдаг."Хоёр флюрофорын хоорондох зай (10-100 А) тохиромжтой үед фторфорын энерги нь донороос хүлээн авагч руу шилжиж байгааг ажиглаж болно."Эрчим хүч дамжуулах арга нь рецепторын химийн бүтцээс хамаарна.
1. Молекулын чичиргээ болж хувирдаг, өөрөөр хэлбэл, энерги дамжуулах гэрэлтдэг гэрэл алга болдог.(Рецептор нь гэрэл унтраагч юм)
2. Ялгарал нь рецептороос илүү хүчтэй бөгөөд хоёрдогч флюресценцийн спектрийн улаан шилжилтийг бий болгодог.(Рецепторууд нь гэрэл цацруулагч юм).
Донорын бүлэг (EDANS) болон хүлээн авагч ген (DABCYL) нь ХДХВ-ийн протеазын байгалийн субстраттай жигд холбоотой байдаг бөгөөд субстратыг салгахгүй бол DABCYL нь EDANS-ыг дарж, улмаар фторыг илрүүлэх боломжгүй болдог.ХДХВ-1 протеазыг салгасны дараа EDANS-ийг DABCYL-ээр унтраахаа больсон бөгөөд дараа нь EDANS-ийн люциферазаг илрүүлж болно.Протеазын дарангуйлагчдын хүртээмжийг EDANS-ийн флюресценцийн эрчмийн өөрчлөлтөөр хянаж болно.
FRET пептидүүд нь пептидазын өвөрмөц бус байдлыг судлахад тохиромжтой хэрэгсэл юм.Түүний урвалын үйл явцыг тасралтгүй хянах боломжтой тул ферментийн үйл ажиллагааг илрүүлэхэд тохиромжтой арга юм.Донор/хүлээн авагчийн пептидийн бондын гидролизийн дараа үүссэн гялбаа нь наномоль концентраци дахь ферментийн идэвхийг хэмждэг.FRET пептид бүрэн бүтэн байх үед дотоод флэш гэнэт алга болж байгааг харуулдаг боловч донор/хүлээн авагчийн эсрэг талын аль нэг пептидийн холбоо тасрах үед флэш ялгаруулж, тасралтгүй илрүүлж, улмаар ферментийн идэвхийг тодорхойлох боломжтой.
Шуудангийн цаг: 2023 оны 8-р сарын 14-ний хооронд